(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210322578.3 (22)申请日 2022.03.29 (71)申请人 中国工程物理研究院激光聚变 研究 中心 地址 621999 四川省绵阳市绵山路64 号 (72)发明人 祁道健　周民杰　黄景林　曾勇　 乐玮　魏来　范全平　杨月　 莫文博　温家星　倪爽　李波　 何智兵　赵宗清　杜凯　 (74)专利代理 机构 中国工程物理研究院专利中 心 51210 专利代理师 刘璐 (51)Int.Cl. G01N 21/65(2006.01) G01N 21/01(2006.01) (54)发明名称 一种新冠病毒拉曼标记型抗原检测试纸条 及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于新冠病毒的拉曼标 记型抗原 检测试纸条及其制备方法， 该试纸条包 括底板， 以及沿底板长度方向依次布置的样品 垫、 拉曼探针结合垫、 免疫硝酸纤维素膜和吸水 垫。 所述的制备方法包括步骤(1)拉曼探针制备； (2)拉曼探针标记抗体； (3)结合垫喷涂溶液制 备； (4)膜处理； (5)试纸条组装。 本发明的拉曼检 测试纸条具有较高的灵敏度和特异性， 根据临床 结果显示， 以核酸检测结果为依据， 本发明的拉 曼标记型拉曼检测试纸条阴性样本符合率为 100％， 阳性样本符合率为74.19％， 总符合率为 90.00％， 其中新冠病毒核酸检测ORFa/b基因Ct 值小于37的阳性样本， 本发明试纸条的阳性检出 率为93.75％， 检测准确度大 大优于胶体金法。 权利要求书2页 说明书14页 附图2页 CN 114720450 A 2022.07.08 CN 114720450 A 1.一种新冠病 毒拉曼标记型抗原检测试纸条， 其特征在于： 该试纸条包括底板， 以及沿 底板长度方向依次布置的样品垫、 拉曼探针结合垫、 免疫硝酸纤维素膜和吸水垫， 其中， 所 述拉曼探针结合垫包被有被新冠病毒N蛋白抗体标记的拉曼探针和被新冠病毒S 蛋白抗体 标记的拉曼探针； 所述免疫硝酸纤维素膜有两条检测线和 一条质控线； 所述两条检测线分 别为新冠病毒S蛋白检测线和新冠病毒N蛋白检测线。 2.根据权利要求1所述的新冠病毒拉曼 标记型抗原检测试纸条， 其特 征在于： 所述样品垫为玻璃纤维膜， 膜厚为0.25m m～0.48m m， 层析速度为15m m/min～32mm/min； 所述拉曼探针结合垫为玻璃纤维膜， 膜厚为0.19mm～0.35mm， 层析速度为20mm/min～ 45mm/min； 所述硝酸纤维素膜孔径为8 μm～10 μm， 层析速度为15s/ cm～40s/ cm； 所述吸水垫为特种吸水纸， 膜厚为0.6 0mm～1.13m m， 层析速度为10s/ cm～20s/cm； 所述拉曼探针结合垫具有纳米金属内核， 所述纳米金属内核的直径为30nm～50nm， 二 氧化硅包被厚度为3nm～5nm。 3.根据权利要求1所述的新冠病毒拉曼 标记型抗原检测试纸条， 其特 征在于： 所述两条检测线和质控线两两相距3mm， 所述样品垫长度为17mm， 拉曼探针结合垫长度 为7mm， 硝酸纤维素膜长度为25mm， 吸水垫长度为16mm， 所述两条检测线和质控线两两之间 重叠搭接宽度为2m m， 所述PVC 板长度为6cm， 宽3.9mm。 4.一种新冠病毒拉曼标记型抗原检测试纸条的制备方法， 其特征在于： 该制备方法包 括如下步骤： 步骤(1)、 制备拉曼探针； 步骤(2)、 拉曼探针标记抗体； 步骤(3)、 制备 结合垫喷涂溶 液； 步骤(4)、 膜处 理制得样品垫、 拉曼探针结合垫及免疫硝酸纤维素膜； 步骤(5)、 组装试纸条： 将步骤(4)所得样品垫、 拉曼探针结合垫及免疫硝酸纤维素膜分 别粘贴至PVC底板相应位置， 完成试纸条组装。 5.根据权利要求4所述的新冠病毒拉曼标记型抗原检测试纸条的制备方法， 其特征在 于： 步骤(1)具体为在纳米金属溶液中加入拉曼探针分子摇匀反应， 继续加入APTMS溶液摇 匀反应， 再加入硅酸钠溶液摇匀反应， 最后加入无水乙醇溶液摇匀反应， 离心制得拉曼探 针。 6.根据权利要求4或5所述的新冠病 毒拉曼标记型抗原检测试纸条的制备方法， 其特征 在于： 步骤(2)具体为将步骤(1)中得到的拉曼探针溶于PBS溶液中， 加入TEPSA溶液摇匀反 应， 离心弃上清， 用PBS溶液稀释， 加入NHS和EDC活化剂处理， 再加入新冠病毒 标记抗体孵育 反应， 离心得拉曼探针标记抗体。 7.根据权利要求6所述的新冠病毒拉曼标记型抗原检测试纸条的制备方法， 其特征在 于： 步骤(3)具体为将步骤(2)中得到的拉曼探针标记 抗体溶液中加入封闭剂摇匀进 行封闭 处理， 再加入复溶 液摇匀， 得到结合垫喷涂溶 液。 8.根据权利要求7所述的新冠病毒拉曼标记型抗原检测试纸条的制备方法， 其特征在 于： 步骤(4)膜处 理具体包括：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114720450 A 2制备样品垫： 采用样品垫处 理液将样品垫预处 理， 然后做干燥处 理， 制得样品垫； 制备拉曼探针结合垫： 将步骤(3)得到的结合垫喷涂溶液采用划膜喷金仪喷涂至结合 垫表面， 制得拉曼探针结合垫， 然后干燥处 理， 制得拉曼探针结合垫； 制备免疫硝酸纤维素膜： 以新冠病 毒S蛋白抗体和新冠病毒N蛋白抗体两种抗体作为两 条检测线， 选取包被液作为质控线， 进行划膜， 然后干燥处 理， 制得免疫硝酸纤维素膜。 9.根据权利要求6所述的新冠病毒拉曼标记型抗原检测试纸条的制备方法， 其特征在 于： 步骤(2)中所述的新冠病 毒标记抗体包括新冠病 毒N蛋白标记抗体和新冠病毒S蛋白标 记抗体。 10.根据权利要求7所述的新冠病毒拉曼标记型抗原检测试纸条的制备方法， 其特征在 于： 步骤(3)中所述的复溶液为3％～5％蔗糖、 2％～3％封闭剂、 0.05％～0.1％表面活性 剂和0.5％～1％PVP溶于PBS溶液中， 优选5％蔗糖、 2.5％BSA、 0.05％Triton  x‑100和0.5％ PVP溶于PBS溶 液中。 11.根据权利要求8所述的新冠病毒拉曼标记型抗原检测试纸条的制备方法， 其特征在 于： 步骤(4)中所述的样品垫处理液为1％～3％蔗糖、 2％～3％封闭剂、 0.05％～0.1％表 面活性剂和0.5％～1％PVP溶于PBS溶液中， 优选2％蔗糖、 2.5％BSA、 0.05％Triton  x‑100 和0.5％PVP溶于PBS溶 液中。 步骤(4)中所述的拉曼探针结合垫、 样品垫和免疫硝酸纤维素膜干燥处理为在36～38 ℃干燥处 理8h～12h； 步骤(4)中所述的喷涂液量 为7 μl/cm～8 μl/ cm； 步骤(4)中所述的喷涂 宽度为4mm～6mm； 步骤(4)中所述的检测线抗体划线浓度均为1mg/ml～1.5mg/ml， 划线液量 为1 μl/cm； 步骤(4)中所述的质控线包被新冠病毒N蛋白或新冠病毒N蛋白二 抗体中的一种； 步骤(4)中所述的质控线划线浓度为2mg/ml～3mg/ml， 划线液量 为1 μl/cm。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114720450 A 3