(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210251814.7 (22)申请日 2022.03.15 (71)申请人 山东农业大 学 地址 271018 山 东省泰安市岱宗大街61号 (72)发明人 徐志祥　王汐沫　孙玉奉　陈晨　 张瀛方　 (74)专利代理 机构 济南誉丰专利代理事务所 (普通合伙企业) 37240 专利代理师 尚久恒 (51)Int.Cl. G01N 21/65(2006.01) G01N 21/01(2006.01) (54)发明名称 一种基于嵌入特异性核酸酶DNA水凝胶的表 面增强拉曼光谱传感器 检测链霉素的方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于嵌入特异性核酸酶 DNA水凝胶的表面增强拉曼光谱传感器检测链霉 素的方法。 传感器的制备方法为： 将金纳米棒溶 液与CTAB混合后滴涂到基材上得金纳米棒阵列 拉曼基底； 将DNA的A链和DNA的B 链溶液与4 ‑MB溶 液混合， 加热后冷却得到DNA水凝胶， 将醋酸 铅溶 液与链霉素适配体混合浸入DNA水凝胶， 得到特 异性核酸酶DNA水凝胶； 将其滴涂金纳米棒阵列 拉曼基底上， 得到本发明的传感器。 本发明将 SERS与高选择性目标分析物捕获技术结合， 实现 了链霉素的高效检测， 提高了链霉素检测的稳定 性和灵敏度； 且本发明检出限低， 特异性和信号 重现性好， 适用于食品中链霉素的超灵敏检测。 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图3页 CN 114624223 A 2022.06.14 CN 114624223 A 1.一种基于嵌入特异性核酸酶DNA水凝胶的表面增强拉曼光谱传感器的制备方法， 其 特征在于， 包括以下步骤： (1)将使用种子介导法合成的金纳米棒溶液与CTAB混合后滴涂到预处理过的基材上， 再置于培养皿中直至 完全干燥， 即得 金纳米棒阵列拉曼基底； (2)将DNA的A链溶液和DNA的B链溶液与4 ‑MB溶液混合均匀， 加热后缓慢冷却得到DNA水 凝胶， 将醋酸铅溶 液与链霉素适配 体混合浸 入DNA水凝胶中， 得到特异性核酸酶DNA水凝胶； (3)将步骤(2)制备的特异性核酸酶DNA水凝胶滴涂于步骤(1)制备的金纳米棒阵列拉 曼基底上， 得到基于嵌入特异性核酸酶DNA水凝胶的表面增强拉曼光谱传感器。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述金纳米棒溶液由以下 方法制备： 将HAuCl4溶液与CTAB溶液混合后加入NaBH4溶液， 室温老化得到种子溶液； 另取 HAuCl4溶液与CTAB溶液混合后， 加入硝酸银溶液、 盐酸和抗坏 血酸溶液， 混合均匀后添加种 子溶液， 然后水浴过夜， 离心分散 到纯水中， 即得 金纳米棒溶 液。 3.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述预处理过的基材为亲 水性硅片、 疏 水性硅片、 镀金硅片和玻璃片； 优选的， 所述预处 理过的基材为镀金硅片。 4.根据权利 要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述DNA的A链溶液为使用 HEPES缓冲液稀释DNA的A链底物单体后的溶液， 所述DNA的B链溶液为使用HEPES缓冲液稀释 DNA的B链底物单体后的溶液； 优选的， 所述DNA的A链底物单体的序列为5 ’ ‑TCGAATCTGATAT TTTTCATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGATTTTTCTGGTTACCGAC ‑3’； 所述DNA的B链底物单体 的序列为5 ’ ‑TATCAGATTCGATTTTTTCACTATrAGGAAGAGATGTTTTTGTCGGTAACCAG ‑3’， 其中 TCACTATr AGGAAGAGATG为核酸酶的序列。 5.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 所述链霉素适配体的序列 为5’ ‑AACACAAACCCCAGACCTAGGCGGACGTGCTG GGCTGTCTTGTTTCGTCTTGTGGTCTGGGG‑3’。 6.权利要求1 ‑5任一项所述的制备方法制备得到的基于嵌入特异性核酸酶DNA水凝胶 的表面增强拉曼光谱传感器。 7.权利要求6所述的基于嵌入特异性核酸酶DNA水凝胶的表面增强拉曼光谱传感器在 检测链霉素中的应用。 8.利用权利要求6所述的基于嵌入特异性核酸酶DNA水凝胶的表面增强拉曼光谱传感 器检测链霉素的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)向权利要求6所述的基于嵌入特异性核酸酶DNA水凝胶的表面增强拉曼光谱传感器 的特异性核酸酶DNA水凝胶中加入系列浓度梯度的链霉素 标准溶液， 得到混合物； (2)将步骤(1)所得的混合物滴于权利要求6所述的基于嵌入特异性核酸酶DNA水凝胶 的表面增强拉曼光谱传感器的金纳米棒阵列拉曼基底上， 记录1075 cm‑1处的拉曼强度； (3)以1075cm‑1处的拉曼强度为纵坐标， 链霉素标准溶液浓度的负对数值为横坐标， 绘 制工作曲线； (4)将待测溶液替换步骤(1)中的系列浓度梯度的链霉素标准溶液， 重 复步骤(2)， 利用 步骤(3)绘制的工作曲线对待测溶 液中的链霉素含量进行检测。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述链霉素标准溶液的浓度分 别为0.01nmo l/L、 0.1nmo l/L、 1nmo l/L、 10nmo l/L、 100nmol/L、 150nmol/L。 10.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 步骤(4)中， 所述待测溶液由如下方法制权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114624223 A 2备： 将4.00g样品于50mL离心管中， 加入质量分数为5％磷酸溶液， 混合物震荡5 ‑10min后加 入三氯乙酸， 涡旋混合后离心， 重复2次并合并上清液， 氮气干燥后， 将残渣溶解于纯水中， 0.22‑μm滤膜过 滤后， 得待测溶 液。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114624223 A 3