(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211156113.1 (22)申请日 2022.09.22 (71)申请人 河南省农业科 学院园艺研究所 地址 450032 河南省郑州市金 水区花园路 116号 (72)发明人 张晓伟　魏小春　原玉香　赵艳艳　 董晓冰　王志勇　杨双娟　苏贺楠　 李林　牛刘静　 (74)专利代理 机构 北京中知星原知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11868 专利代理师 马如 (51)Int.Cl. C12N 15/29(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 大白菜显性桔红色基因BrOr的KASP标记及 其应用 (57)摘要 本发明涉及了大白菜显性桔红色基因BrOr 的KASP标记及其应用， 通过BSA ‑seq(bulked   segregant  analysis  sequencing)方法定位到 一个新的显性桔红色基因B rOr； 首次公开了显性 桔红色基因BrOr的SNP标记A09 ‑4063965及其检 测引物BrOr‑KASP1， 该检测引 物包含三条引 物； 通过对遗传群体的DNA进行PCR扩增， 并利用KASP 基因分析系统检测， 发现BrOr ‑KASP1可明显区分 桔红色和白色材料， 可用于桔红色白菜类蔬菜新 品种的选 育。 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 CN 115369123 A 2022.11.22 CN 115369123 A 1.一种大白菜显性桔红色基因BrOr， 其特征在于， 该基因位于A09染色体1.42 ‑12.19Mb 区间内， A 09： 4062751 –4064398Mb， 在A 09染色体中， 在桔红色材料中存在46 70bp的大片段插 入， 而在白色中并不存在。 2.权利要求1所述的基因在白菜育种中的应用， 其特征在于用于培育球心为桔红色的 白菜品种。 3.一种用于鉴定白菜显性桔红色基因BrOr的InDel标记A09 ‑4063965的引物组， 其 中包 括BrOr‑KASP1Fa、 BrOr ‑KASP1Fb、 BrOr ‑KASP1R， 其序列分别为SEQ  ID NO:1‑3所示。 4.一种用于鉴定白菜显性桔红色基因BrOr的InDel标记A09 ‑4063965的试剂盒， 其特征 在于， 所述的试剂盒包括了 权利要求3所述的引物组。 5.根据权利要求 4所述的试剂盒， 还 包括KASP‑PCR所需要的试剂。 6.权利要求3所述的引物组在鉴定白菜显性桔红色基因BrOr的InDel标记A09 ‑4063965 中的应用。 7.权利要求3所述的引物组在辅助白菜育种中的应用。 8.权利要求4或5所述的试剂盒在鉴定白菜显性桔红色基因BrOr的InDel标记A09 ‑ 4063965中的应用。 9.权利要求 4或5所述的试剂盒在辅助白菜育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115369123 A 2大白菜显性 桔红色基因 BrOr的KASP标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及作物分子标记辅助 育种技术领域， 具体涉及 一种大白菜显性桔红色基 因BrOr的高通 量检测标记及其在育种中的应用 背景技术 [0002]大白菜(Br assica rapa ssp.pekinensis)是原产于我国的一种十字花科重要蔬 菜作物。 其心叶通常呈白色、 黄色， 目前市面上也有一些新选育的桔红心大白菜。 与白色心 叶相比， 桔红色心叶白菜积累的类胡萝卜素更多。 类胡萝卜素是一类重要的天然色素 的总 称， 是由8 个异戊二烯单位首尾相连形成的四萜 化合物， 在人类营养和健康方面也 发挥着重 要的作用， 既是体内维生素A的主要来源， 同时还具有抗氧化、 免疫调节、 抗癌、 延缓衰老等 功效。 由于桔红心大白菜颜色艳丽、 营养丰富、 新颖性强等受到了消费者的喜爱， 因此桔红 心大白菜品种是重要的品种选 育方向之一。 [0003]目前在选育桔红色大白菜过程中仍是通过传统的育种手段， 费时费力， 极大的延 缓了育种进程。 利用分子标记可加快品种的选育， 然而已知桔红心基因CRTISO为隐性单基 因控制， 不能在育种中很好的应用。 此外， 国内外 关于白菜桔红心性状缺乏具有应用价值的 分子标记， 限制了其在分子育种中的应用。 使用与桔红心基因紧密连锁的分子标记， 在苗期 就可对植株抗性进 行筛选与鉴定， 提高材料鉴定效率， 有效缩短桔红心品种的培育年限。 因 此， 开发大白菜桔红心连锁分子标记， 对桔红心品种的培 育具有重要的应用价 值。 发明内容 [0004]本发明的第一个方面提供一种大白菜显性桔红色基因BrOr， 其特征在于， 该基因 位于A09染色体1.42 ‑12.19Mb区间内， BraA09g007080.3C(A09： 4062751 –4064398Mb)， 在红 色心叶品种中， A09染色体的569bp位置存在一个4670bp的插入， 而在白色心叶品种中并不 存在。 [0005]本发明的第二个方面是提供上述的基 因在白菜育种中的应用， 其特征在于用于培 育球心为桔红色心叶白菜品种或是白色心叶品种。 [0006]本发明的第三个方面提供一种用 于鉴定白菜显性桔红色基因BrOr的InDel标记 A09‑4063965的引物组， 其中包括BrOr ‑KASP1Fa、 BrOr ‑KASP1Fb、 BrOr ‑KASP1R， 其序列分别 为SEQ ID NO:1‑3所示。 [0007]本发明的第四个方面提供一种用 于鉴定白菜显性桔红色基因BrOr的InDel标记 A09‑4063965的试剂盒， 其特征在于， 所述的试剂盒包括了上述的引物组。 在另外一个具体 的实施例中， 所述的试剂盒还 包括KASP‑PCR所需要的试剂。 [0008]本发明的第五个方面是提供上述的引物组在鉴定白菜显性桔红色基因BrOr的 InDel标记 A09‑4063965中的应用。 [0009]本发明的第六个方面是提供 所述的引物组在辅助白菜育种中的应用。 [0010]本发明的第七个方面是提供上述包含引物组的试剂盒在鉴定白菜显性桔红色基说　明　书 1/4 页 3 CN 115369123 A 3