(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210757008.7 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 广东省农业科 学院设施农业研究所 地址 510640 广东省广州市天河区五山白 石岗街广东省农业科学院设施农业研 究所109室 (72)发明人 郭金菊　张长远　韩鑫　吴廷全　 王瑞　谭德龙　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 林德强 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 与苦瓜全雌性状紧密连锁的SNP分子标记及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与苦瓜全雌性状紧密连 锁的SNP分子标记及其应用， 通过设计引物对该 分子标记进行PCR扩增， 并利用限制性内切酶对 PCR扩增产物进行酶切处理， 即可判断苦瓜样品 的基因型， 进而判断其性别。 本发明提供的SNP分 子标记与苦瓜全雌性状紧密连锁， 分子鉴定与表 型鉴定的总体契合度高， 可为辅助育种提供科学 依据与有效指导， 仅借助科学技术判断进行人为 选择， 可预期取得良好的经济效益。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 115058538 A 2022.09.16 CN 115058538 A 1.与苦瓜全雌性状紧密连锁的SNP分子标记， 其序列如SEQ  ID NO:1所示， SEQ  ID NO.1 所示序列自5 ’端起第31位碱基是SNP位 点， 其碱基为A或G。 2.一种引物， 其特征在于， 所述引物用于扩增权利要求1所述的分子标记； 优选地， 所述 引物的序列为： Mc720‑F:5’ ‑GCCGTCAATAGGCCGATCAAGATCAACTTA‑3’(SEQ ID NO:2)； Mc720‑R:5’ ‑TGAGTGGCTAGGGGAGATTGTTGGT(SEQ ID NO:3)。 3.一种试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒包 含权利要求2所述的引物。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中还包含限制性核酸内切 酶。 5.权利要求1所述的分子标记在鉴定或辅助鉴定苦瓜性别和/或苦瓜辅助育种中的应 用。 6.权利要求2所述的引物在鉴定或辅助鉴定 苦瓜性别和/或苦瓜辅助育种中的应用。 7.权利要求3～4任一项所述的试剂 盒在鉴定或辅助鉴定苦瓜性别和/或苦瓜辅助育种 中的应用。 8.一种鉴定苦瓜性别的方法， 包括检测待测苦瓜样本基因组中权利要求1所述的与苦 瓜全雌性状紧密连锁的SNP分子标记的基因型； 优选为采用权利要求2所述的引物或权利要 求3～4任一项所述的试剂盒对待测苦瓜样本的基因 组DNA进行PCR扩增。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 还包括对所述PCR扩增产物进行测序或酶 切电泳。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特 征在于， 当对所述PCR扩增产物进行酶切电泳时， 若PCR产物被酶切而得到酶切片段， 则待测苦 瓜为雌雄异花同株； 若PCR扩增产物无法被酶切而得到酶切片段， 则待测苦瓜样品为全雌 株； 当对所述PCR扩增产物进行测序 时， 若5’端第31个碱基为A， 则待测苦瓜为雌雄异花同 株， 若为G则为全雌株。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058538 A 2与苦瓜全雌性状紧密连锁的SNP分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于农业生物技术领域， 具体涉及与苦瓜全雌性状紧密连锁的SNP分子标 记及其应用。 背景技术 [0002]苦瓜是重要的华南特色瓜类蔬菜作物， 具有较高的经济和社会价值。 苦瓜植株的 性型多样， 具有全雌株、 强雌株、 雌雄异 花同株、 强雄株、 完全株、 雄全株等多种性型。 大多 数 苦瓜植株表现为雌雄异 花同株， 在制种过程中需要提前夹花或人工摘除雄花， 费时费力， 且 容易因为雄花摘除不及时或漏摘而影响种子纯度， 并造成亲本材料流失， 严重制约了苦瓜 产业的发展。 因此， 利用苦瓜全雌株作母本进行杂交制种， 是提高种子纯度、 节省劳动力的 最有效方法。 [0003]目前， 人们对苦瓜全雌株的判断主要是在开花期通过肉眼观察开花情况， 存在滞 后性。 此外， 苦瓜性型分化受温度、 光照等环 境影响较大， 容易造成误判。 随着生物技术的快 速发展， 分子标记辅助选择技术已在育种 过程中得到广泛应用， 通过开发与苦瓜全雌性状 连锁的分子标记， 在苗期对植株进行筛 选， 将大大提高育种效率， 缩短育种进程。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种与苦瓜全雌形状紧密连锁的SNP分子标记及其应用。 [0005]本发明所采取的技 术方案是： [0006]本发明的第一方面， 提供与苦瓜全雌性状紧密连锁的SNP分子标记， 其序列是： GC CGTCAATA GGCCGATCAA GATCAACAAAACCGCCAATAGGTCGATCAA GATCCACAAGTTGCCAATA GGCTGATCA AGATCAACAAAACCACCAAGATGCCGATCAA GATCAACAAAACCACCAA GATGCCGATCAA GATCATCAACAAACT GCCAATAGGCTGATCA AGAACCAACAATCTCCCCTAGCCACTCA(SEQ  ID NO:1)。 [0007]本发明的第二方面， 提供一种引 物对， 所述引 物对用于扩增本发明第一方面所述 的分子标记。 [0008]在本发明的一些实施方式 中， 所述引物对的序列为： [0009]Mc720‑F： 5’ ‑GCCGTCAATAGGCCGATCAAGATCAACTTA‑3’(SEQ ID NO:2)； [0010]Mc720‑R： 5’ ‑TGAGTGGCTAGGGGAGATTGTTGGT‑3’(SEQ ID NO:3)。 [0011]本发明的第三方面， 提供一种试剂盒， 所述试剂盒包含本发明第二方面所述的引 物对。 [0012]在本发明的一些实施方式 中， 所述试剂盒中还 包含限制性核酸内切酶。 [0013]在本发明的一些实施方式 中， 所述限制性核酸内切酶为Mse Ⅰ。 [0014]本发明的第四方面， 提供本发明第一方面所述的分子标记在鉴定或辅助鉴定苦瓜 性别和/或辅助育种中的应用。 [0015]本发明的第五方面， 提供本发明第二方面所述的引物对在鉴定或辅助鉴定苦瓜形 状和/或辅助育种中的应用。说　明　书 1/4 页 3 CN 115058538 A 3