ICS 65.020.01 CCS B211 安 34 3 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3719—20200 染 吉野樱 染井吉 樱组培 培育苗技术规 规程 Techhnical regu ulations foor tissue cu ulture of Prunus× yedoensis 2020-12-27 实施 实 2020-111-27 发布 布 安徽省市场 安 场监督管理 理局 发 布 DB 34/T 3719—2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽省林业高科技开发中心提出。 本文件由安徽省林业局归口。 本文件起草单位：安徽省林业高科技开发中心、界首市佳祺农业开发有限公司、安徽天润建筑工程 集团有限公司、芜湖市雨田润农业科技股份有限公司、安徽林业职业技术学院、合肥市包河区林业工作 站、安徽省农科院农业工程研究所、皖西盐肤木研究所、利辛县东方美景园林绿化工程有限公司。 本文件主要起草人：许早时、朱谦、任杰、汪耀、许娟、沈国良、纪坤、殷勇、姚瑶、刘若森、李 春生、李葵阳、孙刚、孟可、孔伶俐、李媛、张作坊、胡仲华、江鸿超、雷经洋。 I DB 34/T 3719—2020 染井吉野樱组培育苗技术规程 1 范围 本文件规定了良种染井吉野樱（Prunus× yedoensis）组培育苗中外植体材料的选择、消毒灭菌、 初代培养、继代培养、生根培养、炼苗、移植、苗期管护、质量标准、包装标签和运输、档案记录管理 等技术要求。 本文件适用于染井吉野樱组培育苗生产作业。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 3095 环境质量标准 LY/T 2289 林木种苗生产经营管理档案 LY/T 2290 林木种苗标签 危险化学品安全管理条例 中华人民共和国国务院令第645号 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 植物组培 plant tissue culture 将从植物体分离出的符合需要的组织、器官或细胞及原生质体等材料，通过无菌操作接种在含有各 种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株的技术。 3.2 接种 inoculation 将消毒后的外植体或干净培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的过程。 3.3 消毒 disinfection 通过物理、化学方法去除物体表面大部分有害病原微生物（孢子除外）的过程。 3.4 灭菌 sterilization 通过物理和化学方法杀灭一切微生物（包括孢子等）的过程。 3.5 外植体 explant 从自然生长的活体植物上获取的用于建立植物组培快繁体系的起始材料。 3.6 初代培养 primary culture 2 DB 34/T 3719—2020 直接从机体取下的细胞、组织和器官等材料的培养。 3.7 继代培养 subculture 将培养材料从老培养基中转接入新鲜培养基中继续培养的过程。 3.8 生根培养 rooting culture 将继代增殖后的无根芽苗转接至生根培养上诱导生根培养得到完整的植株的过程。 3.9 炼苗 acclimatization 炼苗是在保护地育苗的情况下，采取放风、降温、适当控水等措施对幼苗强行锻炼的过程。 4 外植体材料的选择 4 月～6 月从染井吉野樱健壮母株上截取半木质化的腋芽茎段或顶芽等器官作为组培快繁体系的 外植体材料。 5 5.1 消毒灭菌 洁净 用 1% ～ 2% 的洗衣粉水浸泡 20 min ～ 30 min，用软毛刷去除外植体表面的尘土等杂质，再用 流动的自来水冲洗 2 h～4 h。 5.2 消毒 洁净后的外植体材料至超净工作台上用质量分数 70%～75% 乙醇消毒 8 s～15 s 后，用无菌水清 洗 3 次～6 次。 5.3 灭菌 用 15% 次氯酸钠溶液浸泡 8 min ～ 15 min，用玻璃棒搅拌；无菌水冲洗 4 次～6 次，最后用无 菌纱布或无菌滤纸吸干外植体表面水珠后待用。消毒剂按照 GB 3095 及中华人民共和国国务院令第645 号的规定执行。 6 初代培养 诱导培养基为 MS+BA 0.5 mg/L～1.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L+TDZ 2.0 mg/L ～3.0 mg/L+蔗糖20 g/L ～ 30 g/L+琼脂 5.5 g/L～6.5 g/L。将经过消毒处理后的染井吉野樱腋芽茎段或顶芽切成 1.5 cm～2.5 cm 小段接种至上述培养基中。先在 22℃ ～25 ℃条件下全暗培养 5 d～7 d，然后置于每天光照 10 h～ 12 h，光照强度 1500 lx～2000 lx 的培养室中培养，25 d 左右继代一次，直至诱导形成丛生芽。 7 继代培养 继代培养基为1/2MS+BA0.5 mg/L～0.8 mg/L+NAA0.05 mg/L～0.08 mg/L+蔗糖20 g/L～30 g/L+琼脂 5.5 g/L～6.5 g/L。将4.3获得的丛生芽分切成芽块至继代增殖培养基中，置于每天光照10 h～12 h， 3 DB 34/T 3719—2020 光照强度约2000 lx ，培养温度22℃～25 ℃的条件下培养，多次反复切割进行继代增殖培养，直至得 到健壮丛生芽。 8 生根培养 生根培养基为1/2MS+NAA0.01 mg/L～0.02 mg/L+蔗糖20 g/L + 琼脂5.5 g/L～ 6.5 g/L。将4.4获 得的高度约为2.5 cm～3.5 cm的健壮芽分切接种至生根培养基中，接种后先在22℃～25℃左右条件下暗 培养 0 d～5 d，然后置于光照10 h～12 h，光照强度2000 lx，温度为22℃～25 ℃左右的培养室中培 养30 d ～35 d 即可出瓶。 9 炼苗 9.1 生根苗移植条件 在培养容器中生长的根、茎、叶俱全的完整植株，苗高3.5 cm～5.5 cm，基部长出3 根～5根不定 根时，即可进行炼苗。 9.2 炼苗方法 将培养容器松开容器盖放置在有散射光的温室中3 d～5 d，温度控制在（25±5）℃。 10 移植 10.1 移植时间 生根瓶苗一般在春季（3月～5月）或秋季（9月～11月）炼苗移植为宜。 10.2 栽培基质 泥炭土、园土及珍珠岩按 5：3：2 的比例混配，用 75％可湿性多菌灵粉剂 1000 倍溶液喷透混匀， 装入穴盘中并稍压实待用。 10.3 洗苗 取出组培苗，放入自来水中将表面培养基漂洗干净，并用 75％可湿性多菌灵粉剂 1500 倍溶液浸 泡 20 min～30 min，最后用自来水冲洗一次。操作过程中注意轻拿轻放。 10.4 移植方法 在穴盘基质上打孔，孔径 1 cm 左右，孔深 3 cm 。将洗净的组培苗植入孔中，保持根系舒展。 10.5 摆放 穴盘苗按移植日期在温室苗床上整齐摆放。 11 苗期管理 11.1 4 缓苗期管理 DB 34/T 3719—2020 缓苗期大约 15 天左右。温度应控制在 15℃～30℃；每天定期给幼苗喷雾保湿，叶片周围湿度保 持在 75％～90％；遮光率 70％左右。 11.2 幼苗期管理 待15 d 长出新叶、新根后便进入温室正常管理。温室大棚相对湿度保持在 60％～70％。 11.3 施肥 移植 4 周～8 周内，每周可喷施高氮型叶面肥（N：P：K=40：20：20）)一次，稀释浓度为 2000 倍液。8 周后视植株生长情况，调整施肥的肥料种类、浓度和次数。 12 质量标准 12.1 组培苗质量标准 在培养容器中生根培养 30天～35 天，生根苗达表1合格苗标准即可出瓶。 表1 染井吉野樱组培生根苗质量标准 类目 质量要求 株形 苗粗壮、挺直有活力，叶片大小协调 根系 有不定根 3条～5 条，根长适中色白健壮 苗高 3 cm～8 cm 叶色及数量 叶正常，叶色具母本特性，有光泽，4片～6 片 整齐度 同一培养周期，90％以上的苗高度一致 有无污染 无污染或培养基少量点状污染 有无病虫害 12.2 无 组培穴盘苗的质量标准 温室培育40 d 后，穴盘苗达表2合格苗标准即可出圃。 表2 类目 质量要求 株形 苗矮壮墩实、挺拔，株形饱满、完整 根系 有完整而发达的根系，根系充满穴盘孔 苗高 10 cm～15 cm 叶色及数量 整齐度 纯度 13 染井吉野樱穴盘苗质量标准 叶色泽正常，具母株品种特性，4片～6 片 同一批次 95％以上的苗高度一致 变异率低于 5％ 有无病害 无 有无虫害 无 包装、标签和运输 13.1 包装 5 DB 34/T 37719—2020 13.1.1 组 组培苗产品按照客户（或者 者订单）要求 求包装。 13.1.2 琼 琼脂苗包装：琼 琼脂苗保留在 在培养容器中 中，培养容器 器整齐摆放于 于泡沫箱，箱 箱外再用纸箱包装，超 过 25℃泡沫 沫箱应加冰袋 袋。为防止上 上下倒置，运 运输时可使用 用托盘。 13.1.3 无 无琼脂苗包装：生根组培苗 苗洗去琼脂后 后，先装入小 小塑料盒（袋 袋），再放在 在泡沫箱里，箱 箱外再用 纸箱包装，超过 25℃泡 泡沫箱应放冰 冰块。 13.1.4 穴 穴盘苗包装：穴盘装在小纸 纸箱内，再将 将小纸箱装入 入大纸箱内，每箱装 3 个 个～4 个穴盘，运输时 宜使用托盘 盘。 13.2 标签 签 注明树 树种、品种、苗龄、原产地 地、产地、 质量指标、 生产日期、林木种子生 生产经营许可 可证编号、 植物检疫证 证明编号、苗批 批号、备注（对于进口苗 苗木、转基因 因材料繁殖的 的苗木、授权 品种苗木以及 及药剂处 理等的苗木 木进行备注）。按照 LY/T T 2290 的规 规定执行。 13.3 运输 输 装车时 时切勿倒置，用厢式货车运 用 运输以避免日 日晒、雨淋，运输途中温度 运 度保持 10℃ ～25℃，应在 在 5d 内 到达目的地 地。 14 档案记 记录管理 在林木 木种苗生产经 经营活动中形成 成的具有保存 存价值的文字 字、图表、声 声像等不同形 形式的记录，能 能真实反 映生产经营 营种苗的来源 源、产地、数量 量、质量与销 销售去向、销 销售日期等内 内容，保证生 生产经营过程 程可追溯。 按照 LY/T 2289 的规定 定执行