ICS 67.080 CCS B 31 湖 43 南 省 地 方 标 准 DB43/T 2326—2022 桑黄液体菌种生产技术规程 Technical regulations for liquid spawn production of Sanghuangporus 2022 - 05 - 06 发布 2022 - 08 - 06 实施 湖南省市场监督管理局 发 布 DB43/T 2326—2022 目 次 前言························································································································ Ⅲ 1 范围 ····················································································································· 1 2 规范性引用文件 ······································································································ 1 3 术语和定义 ············································································································ 1 4 场地环境 ··············································································································· 1 5 生产工艺 ··············································································································· 2 6 液体菌种质量指标 ··································································································· 3 7 贮存 ····················································································································· 3 8 档案管理 ··············································································································· 4 附录 A（资料性） 常用摇瓶种培养基配方 ······································································· 5 附录 B（资料性） 常用液体发酵培养基配方 ···································································· 6 附录 C（资料性） 桑黄液体菌种生产档案 ······································································· 7 I DB43/T 2326—2022 II DB43/T 2326—2022 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南省微生物研究院、湖南湘蕈生物科技有限公司。 本文件主要起草人：唐少军、许隽、喻桃生、雷平、邵晨霞、贺月林、吴胜莲、靳磊、杨祎。 III DB43/T 2326—2022 IV DB43/T 2326—2022 桑黄液体菌种生产技术规程 1 范围 本文件规定了桑黄液体菌种生产的术语和定义、生产要求、生产工艺、液体菌种质量指标、贮存和 档案管理等。 本文件适用于桑黄液体菌种的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅 该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.28 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1284 食用菌菌种中杂菌及害虫的检验 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 1935 食用菌栽培基质质量安全要求 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 桑黄 sanghuangporus 桑 黄 在 分 类 上 属 于 担 子 菌 门 (Basidiomycota) 、 伞 菌 纲 （ Agaricomycetes ）、 锈 革 孔 菌 目 （Hymenochaetales）、锈革孔菌科（Hymenochaetaceae），桑黄菌属（Sanghuangporus），是一类珍贵的 具有重要药用价值的大型真菌。 4 场地环境 4.1 场地 菌种制作场地环境条件应符合 NY/T 528 的规定。用水符合 GB 5749 的规定。 4.2 环境 环境卫生应符合 NY/T 528 的规定。 4.3 厂房 条件应符合 NY/T 528 和 NY/T 1731 的规定。 1 DB43/T 2326—2022 5 生产工艺 5.1 工艺流程 母种→摇瓶种→发酵罐清洗→空灭→投料与定容→灭菌→冷却→接种→发酵培养→检测→贮存 5.2 母种制备 母种制备应符合 NY/T 528 的要求。 5.3 摇瓶种制备 5.3.1 培养基 原料应符合 NY/T 1935 的规定，参照附录 A 配制。 5.3.2 装液量 采用 1000 mL 的常规三角瓶，每瓶装液量为 200 mL～300 mL，用八层纱布和牛皮纸封口。 5.3.3 灭菌 在 121 ℃～126 ℃，0.14 MPa～0.16 MPa 的压力下，保持 25 min。 5.3.4 接种 将灭菌后的培养基冷却至 30 ℃以下，无菌条件下用打孔法（10 mm 孔径）将菌丝块接种到摇瓶中， 每 100 mL 液体培养基接种 3～5 个菌丝块。 5.3.5 培养 接种后移至摇床，在 26 ℃，130 r/min 条件下培养 10 d 5.4 发酵罐清洗 5.4.1 检查 罐上全部阀门、安全阀、压力表等要求完好，工作正常。 5.4.2 清洗 流水清洗罐体内外，达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。 5.5 空灭 空罐灭菌，应在压力 0.14 Mpa～0.16 Mpa、温度 121 ℃～126 ℃下持续灭菌 40 min。 5.6 培养基配制 材料应符合 NY/T 1935 的规定，参照附录 A 规定配制。 5.7 装液量 发酵罐总体积的 60％～70％。 2 DB43/T 2326—2022 5.8 灭菌 用夹层预热培养基至 80 ℃后，蒸汽进罐升温至 121 ℃～126 ℃，0.14 MPa～0.16 MPa 保压恒温 40～60 min。 5.9 冷却 培养基冷却至 26 ℃～28 ℃。 5.10 接种 按常规接种方式接种，接种量为 10％（V/V） 。 5.11 发酵培养 罐温为 26 ℃～28 ℃， 罐压为 0.02～0.04 MPa， 通气量为 1︰0.5 V/V•min，搅拌速度为 130 r/min～ 160 r/min，培养时间为 8～10 d。 5.12 检测 发酵后第 4 d 开始定期检测，检测方法应符合 NY/T 1284 的规定。 6 液体菌种质量指标 6.1 感官指标 6.1.1 形态与色泽 具有“毛刺”的球状菌丝体呈黄色，菌液呈棕色。菌液稍粘稠，有大量菌丝球悬浮、分布均匀、不 上浮、不下沉、不迅速分层，液体不浑浊。 6.1.2 菌液气味 培养器排气口气味正常，有桑黄菌丝气味，无酸、臭味等。 6.2 理化指标 6.2.1 酸碱度 pH 值 4.5～6.0。 6.2.2 菌丝量 菌丝湿重（g/L）≥120。 6.2.3 纯度 无杂菌 7 贮存 7.1 标签 生产的菌种必须贴有质量合格标签，其内容包含菌种种类、级别、品种、生产单位、接种日期。 3 DB43/T 2326—2022 7.2 贮存条件 7.2.1 摇瓶种保存 4 ℃、暗光条件下可保存 5 d～7 d。 7.2.2 种子罐液体菌种保存 15 ℃～20 ℃可保存 2 d～3 d。 8 档案管理 生产档案应有电子档案和纸质档案保存，资料记录完整准确，档案内容见附录 C。档案记录一式 2 份保存于生产基地和技术指导单位，档案保存 3 年以上。 4 DB43/T 2326—2022 附 录 A （资料性） 常用摇瓶种培养基配方 A.1 玉米粉（或玉米淀粉）1％，蔗糖 2％，蛋白胨 0.2％，酵母粉 0.3％～0.5％，磷酸二氢钾 0.1％， 硫酸镁 0.06％。 A.2 葡萄糖 3％，豆饼粉 2％，玉米粉 1％，酵母粉 0.5％，磷酸二氢钾 0.1％，碳酸钙 0.2％，硫酸镁 0.05％，pH 值 6.0。玉米粉，豆饼粉均过 80 目筛。 5 DB43/T 2326—2022 附 录 B （资料性） 常用液体发酵培养基配方 B.1 黄豆粉 3％，葡萄糖 4％，蛋白胨 0.2％，硫酸铵 0.2％，氯化钠 0.25％，磷酸二氢钾 0.1％。 B.2 可溶性淀粉 3％～6％，白砂糖 1％，磷酸二氢钾 0.3％，硫酸镁 0.15％，酵母膏 0.1％，pH 值 6。 6 DB43/T 2326—2022 附 录 C （资料性） 桑黄液体菌种生产档案 表 1 桑黄液体菌种生产档案 编号： 基地名称 联系人 联系电话 地址 所属单位名称 发酵技术情况 培养基配制 时间