ICS 65.020.01 CCS T ZNZ B05 浙江省农 产 品 质量安全学会团体标准 T/ZNZ 320—2025 植物源性食用农产品中总花色苷含量的测 定 分光光度法 Determination of total anthocyanin content in edible agricultural products of plant origin — Spectrophotometric method 2025 - 02 - 18发布 2025 - 03 - 18实施 浙江省农产品质量安全学会 发布 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 320 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的 责任。 本文件由 浙江省农产品质量安全学会提出并归口。 本文件起草单位： 中国水稻研究所、农业农村部稻米及制品质量检验测试中心。 本文件主要起草人： 邵雅芳、朱大伟、牟仁祥、徐清宇、章林平、陈铭学。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 320 —2025 1 植物源性食用农产品中总花色苷含量的 测定 分光光度法 1 范围 本文件规定了植物源性农产品中总花色苷含量的分光光度检测方法。 本文件适用于谷物、薯类、果蔬等植物源性食用农产品中总花色苷含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 花色苷 anthocyanin 花青素与糖以糖苷 键结合而成的一类 化合物，能使植物呈现由红、紫红到蓝等不同颜色。 4 原理 花色苷发色团的结构转换与 pH 值相关。pH为1.0时，花色苷以红色的 2-苯基苯并吡喃的形式存在； pH为4.5时，花色苷以无色甲醇假碱形式存在 。花色苷在 520 nm波长处有吸收峰，在 700 nm波长处有干 扰峰。分别测定待测 样品在pH值为 1.0和4.5缓冲液中 520 nm和700 nm波长下的吸光值， 根据吸光度示 差值（ A）计算待测样品中 总花色苷的含量（ω）。 5 试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂和符合 GB/T 6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 浓盐酸 (HCl)：质量分数为 36%-38%。 5.1.2 甲醇 (CH3OH)。 5.1.3 氯化钾（ KCl）。 5.1.4 醋酸钠（ CH3COONa）。 5.2 试剂配制 5.2.1 盐酸溶液 [c (HCl) =1 mol/L] ：吸取16.66 mL 浓盐酸（ 5.1.1），缓慢加入约有100 mL水的 烧杯中，搅拌均匀。待冷却至常温后，转移至 200 mL容量瓶中 定容。 5.2.2 提取液：甲醇（ 5.1.2）和盐酸溶液（ 5.2.1）按照体积 85+15混合，即取 850 mL甲醇和150 mL盐酸溶液混匀。 5.2.3 氯化钾溶液（ pH = 1.0）：称取14.9 g氯化钾（5.1.3）于烧杯中，加入 1 L水溶解，并用盐 酸溶液（ 5.2.1）调整pH值至1.0，现用现配。 5.2.4 醋酸钠溶液（ pH = 4.5）：称取16.4 g醋酸钠（ 5.1.4）于烧杯中，加入 1 L水溶解，并用盐 酸溶液（ 5.2.1）调整pH值至4.5，现用现配。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 320 —2025 2 6 仪器 6.1 分光光度计： 波长范围 （380 nm ~ 880 nm ）。 6.2 分析天平：感量为 0.001 g。 6.3 磨粉机和匀浆机。 6.4 离心机：转速 ≥6000 r/min。 6.5 摇床。 7 分析步骤 7.1 试样制备 采用四分法分取样品。 水分含量低的样品，如黑米、黑豆等 谷物类和豆类 ，用磨粉机进行粉碎， 过孔径为 250 μm的筛子； 水分含量高的样品， 如杨梅、蓝莓、葡萄、茄子等 水果类和蔬菜类 ，将样品 切碎混匀、四分法后 取约 200 g 于匀浆机中匀浆。所有样品在 -18 °C条件下保存备用。 7.2 总花色苷提取 水分含量 低的样品，称取 粉碎后的平行 试样0.5 g（精确至 0.001 g）；水分含量 高的样品，称取 匀浆后的平行 试样5.0 g（精确至 0.001 g）。将称好的样品置于 50 mL离心管中，向其加入 10 mL提取 液 (5.2.2)，混匀后摇床 振荡20 min，然后6000 r/min 离心10 min，并将上清液倒入 50 mL具盖离心 管中。再向 含有残渣的 50 mL离心管中加入 10 mL提取液进行二次提取，合并两次提取液，定容至 25 mL， 待测。 7.3 测定 准确吸取 2.5 mL提取液（ 5.2.2），用氯化钾溶液（ 5.2.3）定容至25 mL，混匀，作为空白分别在 520 nm和700 nm处调零。取 2.5 mL样品提取液， 用氯化钾溶液（ 5.2.3）定容至25 mL（稀释10倍，DF = 10），混匀后， 10 min内用1 cm光程的比色皿 测定520 nm和700 nm处的吸光值， 分别记为 A520 和 A700。 取2.5 mL提取液（ 5.2.2），用醋酸钠溶液（ 5.2.4）定容至25 mL，混匀，作为空白分别在 520 nm 和700 nm处调零。取 2.5 mL样品提取液， 用醋酸钠溶液（ 5.2.4）定容至25 mL（稀释10倍，DF = 10）， 混匀后， 10 min内用1 cm光程的比色皿 测定520 nm和700 nm处的吸光值， 分别记为 A´520 和 A´700。 8 结果计算 待测液的吸光度示差值 A 按公式（ 1）计算。 A = (A520- A700) - (A´520- A´700) ································ ·························· (1) 式中： A520—提取液在 氯化钾溶液（ 5.2.3）中520 nm处的吸光值 ； A700—提取液在 氯化钾溶液（ 5.2.3）中700 nm处的吸光值 ； A´520—提取液在 醋酸钠溶液（ 5.2.4）中520 nm处的吸光值 ； A´700—提取液在 醋酸钠溶液（ 5.2.4）中700 nm处的吸光值 。 食用农产品中总花色苷含量以 当量的矢车菊素 -3-O-葡糖苷 ω 表示，单位以克每千克（ g/kg）表 示，按公式（ 2）计算。 𝜔=𝐴×𝑀𝑊×𝐷𝐹×𝑉 𝜀×𝐿×𝑚 ································ ································ ····· (2) 式中： ω—待测样品中总花色苷含量（以当量的矢车菊素 -3-O-葡糖苷表示），单位为克每千克（ g/kg）； A—待测液的吸光度示差值； MW—矢车菊素 -3-O-葡糖苷的分子质量，为 449.2 g/mol ； DF—待测液的稀释倍数； 全国团体标准信息平台