团体标准 T/CSTE0379—2023 2023-09-01实 2023-08-1 5 发布 施 中国技术经济学会发布ICS07.080 CCSA40 生物活性肽的鉴别和细胞活性测定 IdentificationandCytoactivityDeterminationofBioactivePeptides 全国团体标准信息平台 T/CSTE0379—2023 I 版权保护文件 版权所有归属于该标准的发布机构，除非有其他规定，否则未经许可，此发行物及其章节不得以其他形 式或任何手段进行复制、再版或使用，包括电子版、影印版，或发布在互联网及内部网络等。使用许可 可与发布机构获取。 全国团体标准信息平台 T/CSTE0379—2023 II目次 前言.......................................................................................................................................................................III 1范围...................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件..............................................................................................................................................1 3术语和定义......................................................................................................................................................1 4缩略语...............................................................................................................................................................1 5概述...................................................................................................................................................................1 6新建生物活性肽标准品的制备和标定..........................................................................................................1 7生物活性肽供试品的鉴别和细胞活性测定..................................................................................................3 附录A（资料性）生物活性肽（三肽-1）的纯度检测（HPLC法）.........................................................5 附录B（资料性）生物活性肽（三肽-1）分子量和氨基酸序列测定（LC-MS/MS法）........................7 附录C（资料性）生物活性肽（三肽-1）标准品细胞活性标定（细胞增殖法/MTT比色法）............11 附录D（资料性）生物活性肽（三肽-1）供试品细胞活性测定（细胞增殖法/MTT比色法）...........14 全国团体标准信息平台 T/CSTE0379—2023 III前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国技术经济学会提出并归口。 本文件起草单位：珠海金肽生物科技有限公司、中国人民解放军总医院第七医学中心、珠海亿胜生 物制药有限公司、上海昊海生物科技股份有限公司、珠海市第三人民医院、浙江大学、广州先进技术研 究所。 本文件主要起草人：周守山、杨蓉娅、戴稳平、吴锐、林晓、郑赞顺、宋冠瑛、周庆玮、夏洁敏、 黄明星、李晓亮、姚之侃、王希。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/CSTE0379—2023 1生物活性肽的鉴别和细胞活性测定 1范围 本文件规定了生物活性肽的鉴别和细胞活性测定方法。 本文件适用于具有特定氨基酸序列且具有特定细胞活性的生物活性肽的鉴别和细胞活性测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T16631高效液相色谱法通则 GB/T38790.1生物活性肽的功效评价第一部分：总则 GB/T39100多肽抗氧化性测定DPPH法和ABTS法 GB/T39101多肽抗菌性测定抑菌圈法 中华人民共和国药典（2020年版） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1生物活性肽bioactivepeptides，BAP 生物活性肽是对生物体的生命活动具有特定调控作用的肽类化合物。 3.2细胞活性cytoactivity 细胞活性是指生物活性肽对特定靶细胞的增殖、抑制和相关生理活动的调节能力。 3.3细胞活性单位cytoactiveunit，CU 本文件中，一个细胞活性单位对应为生物活性肽通过特定方法测定的EC50（µg/mL）值。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 EC50：半数有效浓度（HalfMaximalEffectiveConcentration） HPLC：高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography） LC-MS/MS：液相色谱串联质谱（LiquidChromatography--MassSpectrometry/MassSpectrometry） 5概述 本文件以生物活性肽标准品作为对照品，对生物活性肽供试品进行鉴别和细胞活性测定。生物活性 肽标准品应进行必要的分析鉴别，参照《中华人民共和国药典》（2020年版）三部生物制品国家标准物 质制备和标定的相关要求，对标准品的纯度、分子量、氨基酸序列、细胞活性等进行分析。 本文件附录根据相关规定，以三肽-1为实例，从生物活性肽的纯度检测、分子量测定、氨基酸序列 测定、新建生物活性肽标准品细胞活性标定和生物活性肽供试品细胞活性测定等方面，对本文件进行了 进一步说明。 6新建生物活性肽标准品的制备和标定 全国团体标准信息平台 T/CSTE0379—2023 26.1新建生物活性肽标准品的要求 （1）纯度不低于95.0%； （2）测定分子量与理论值差值在5ppm以内； （3）氨基酸序列与理论序列一致。 6.2新建生物活性肽标准品的鉴别 6.2.1纯度确认 参照《中华人民共和国药典》（2020年版）四部通则0512高效液相色谱法进行检测，按面积归一化 法计算纯度，其结果应符合本文件6.1（1）要求。 6.2.2分子量确认 采用LC-MS/MS法进行检测，测定新建生物活性肽标准品分子量，其结果应符合本文件6.1（2）要 求。 6.2.3氨基酸序列确认 采用LC-MS/MS法进行检测，测定新建生物活性肽标准品氨基酸序列，其结果应符合本文件6.1（3） 要求。 6.3新建生物活性肽标准品的分装、冻干和包装 根据各种标准物质的要求进行配制、稀释，经质量检验合格后，精确分装，分装后立即进行冻干和 包装。 6.4新建生物活性肽标准品的检测项目 根据新建生物活性肽标准品的特性和使用目的，进行分装精度、水分、无菌、残留溶剂、炽灼残渣 检测和细胞活性标定，以及稳定性研究，并根据需要增加其他必要的检测项目。 6.4.1分装精度 按照《中华人民共和国药典》（2020年版）三部生物制品国家标准物质制备和标定的相关要求，精 确度应在±1%以内。 6.4.2水分 按照《中华人民共和国药典》（2020年版）四部通则0832水分测定法第一法（费休氏法）测定，结 果应不高于3%。 6.4.3无菌 按照《中华人民共和国药典》（2020年版）四部通则1101无菌检查法进行检测，结果需无菌。 6.4.4残留溶剂 按照《中华人民共和国药典》（2020年版）四部通则0861残留溶剂测定法进行检测，结果应符合该 方法所标示范围。 6.4.5炽灼残渣 按照《中华人民共和国药典》（2020年版）四部通则0841炽灼残渣检查法进行检测。 6.4.6细胞活性 按照本文件6.5进行细胞活性标定。 6.4.7稳定性研究 按照本文件6.6进行稳定性研究。